果蔬中可溶性糖含量的测定(苯酚-硫酸法)
果蔬中可溶性糖( soluble sugar)主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。果蔬组织中可溶性糖含量的高低与其品质、成熟度和贮藏性密切相关。糖是果蔬组织中重要的能量贮藏物质,也是果蔬甜味的主要来源。糖还是果蔬呼吸作用的主要底物。果蔬在采收以后成为独立的生命个体,不能再从环境中吸收养分和能量。果蔬采后的一切生命活动中所需的能量和中间物质主要来源于果蔬组织中糖类物质的氧化分解过程。因此,测定可溶性糖含量在果蔬品质评价和贮藏保鲜中具有重要意义。
对于可溶性糖的测定方法有很多,大致可分为三类:
①物理法:旋光法、折光法、相对密度法;
②物理化学法:
点位法、极谱法、光度法、色谱法;
③化学方法:斐林氏法、高锰酸钾法、碘量法、铁氰化钾法、蒽酮比色法、咔唑比色法等。
在测定其它碳水化合物时，往往通过酸解,使其水解为可溶性的且具有还原性的单糖,再进行测定。因此,可溶性糖和还原糖的测定技术,是研究其它大分子碳水化合物及其代谢相关酶活性和性质的重要方法基础。
苯酚 -硫酸法
目的要求
掌握利用苯酚-硫酸法测定果蔬组织中可溶性糖含量的原理和方法。
基本原理
糖在浓硫酸的作用下脱水生成的糖醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物。这种化合物在波长485nm处具有最大吸收峰。在10 ~ 100mg范围内,该橙红色化合物的颜色深浅与糖的含量呈正相关关系，故可通过比色法测定此波长下吸光度值来计算出糖含量。苯酚-硫酸法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色可稳定160min以上。
材料、仪器及试剂
(一)材料
各种果蔬组织。
(二)仪器及用具
分光光度计水浴锅、具塞刻度试管(25mL)、移液管(10mL)或移液器、研钵、容量瓶(100mL)、滤纸、漏斗、玻璃棒等。
(三)试剂
1、0.09g/mL苯酚溶液
称取
90.0g重结晶苯酚,加蒸馏水溶解、稀释至100mL,即为0.9g/mL苯酚溶液,可在室温下保存数月。
取
10mL0.9g/mL苯酚溶液,加蒸馏水稀释至100mL,混匀,即为0.09g/mL苯酚溶液，现用现配。
2、浓硫酸(相对密度1.84)
3、100μg/mL 蔗糖标准液
将分析纯蔗糖在
80℃下烘至恒重,精确称取1. 000g,加少量蒸馏水溶解,转入到100mL容量瓶中,加入0.5mL浓硫酸,再用蒸馏水定容至刻度,即为0.01g/mL蔗糖标准液。
精确吸取
1mL0.01g/mL蔗糖标准液于100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度，摇匀,即为100μg/mL蔗糖标准液。
实验步骤
(一)标准曲线的制作
取6支25mL刻度试管(重复做两组),编号后按表3加入100μg/mL蔗糖标准液和蒸馏水。再按顺序向试管内加入1.0mL 90g/L苯酚溶液,摇匀,再从管液正面在5 ~ 20s内加入5mL浓硫酸，摇匀。混合液总体积为8mL,在室温下放置30min进行反应。然后,以空白为参比，在波长485nm处比色测定混合反应液的吸光度值。以蔗糖质量为横坐标，吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求出线性回归方程。
(二)可溶性糖的提取
称取1.0g果蔬组织置于研钵中，研磨呈浆状后，加入少量蒸馏水，转人到刻度试管中,再加人5~10mL蒸馏水，用塑料薄膜封口，于沸水中煮沸提取30min,取出待冷却后过滤,将滤液直接滤人到100mL容量瓶中，再将残渣回收到试管中，加入5 ~ 10mL蒸馏水再煮沸提取10min，并过滤人容量瓶中，用水反复漂洗试管及残渣,过滤后一并转人容量瓶并定容至刻度。
(三)可溶性糖的测定
取1支25mL刻度试管，吸取0.5mL样品液于试管中,加入1.5mL蒸馏水。测定步骤与制作标准曲线相同,按顺序分别加入0.09g/mL苯酚溶液、浓硫酸,显色并测定吸光度值。重复三次。如果吸光度值读数过高,可将样品液稀释后再吸取0.5mL进行反应和测定。
实验结果与计算
1.测定数据记录
2.计算结果
根据显色液吸光度值,在标准曲线上查出相应的蔗糖质量，按下式计算果蔬组织中可溶性糖含量，以质量分数(% )表示。计算公式:
式中
m′——从标准曲线查得的蔗糖质量,μg;
V——样品提取液总体积，mL;
N——样品提取液稀释倍数;
VS
——测定时所取样品提取液体积,mL;
m——样品质量,g。
注意事项
(1)由于苯酚-硫酸法测定糖含量是受到多种因素的影响,重现性较差,所以在测定果蔬组织中糖含量时,对操作者要求很高。最好始终一人操作，把每个细节都能固定下来。要尽量多做平行实验，以减少个人操作习惯带来的误差。
(2)利用苯酚-硫酸法测定可溶性糖对苯酚的要求很高。最好利用经过重蒸馏、结晶的苯酚。
(3)浓硫酸的纯度、滴加方式和速度，如直接加在液面上还是慢加等,都会对实验结果产生影响。因此,操作方式一定要一致才能获得较好的重现性。
(4)果实组织糖含量很高,在测定时应注意进行适当的稀释。一般可以取1mL或10mL样品提取液，置于100mL容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,即将样品液稀释了100倍或10倍。
一般先进行预实验，确定基本的实验条件。一般情况下,反应后的混合液比色时，吸光度值都较高，为了使吸光度值读数处于适当的范围,应对提取液进行稀释,稀释后再进行反应、测定。切忌对反应后的混合液进行稀释。因为在反应后的混合液中硫酸:的浓度很高,稀释反应混合液时一方面会导致溶液放出大量的热,另一方面会导致反应混合液中硫酸浓度降低,引起混合液颜色变化。在浓硫酸作用下,糖醛或羟甲基糠醛才能与苯酚缩合成的化合物呈橙红色(红棕色)。而在稀硫酸中,该化合物的颜色将会发生变化。
此外,稀释过程往往会使实验误差加大。在具体操作时，一定要严谨、认真地进行。
(5)样品中可溶性糖含量的测定过程必须与标准曲线的制作过程相同。
(6)如果样品中含有较多葡萄糖，加热时间应延长至45min，因为葡萄糖显色较慢。
2022年南通妇幼保健院试管婴儿收费参考标准为一代试管婴儿费用2.5-3.5万元，二代试管婴儿费用3-4万元。其中第一代试管婴儿医疗费用费用包括前期男女双方的检查费用5000元左右，降调促排卵用药费用8000-20000元不等，取卵手术费用5000元左右，胚胎培育与囊胚胚胎费用3000-10000元，胚胎/囊胚移植费用5000-8000元。
南通妇幼保健院可开展一代和二代试管婴儿
南通妇幼保健院试管婴儿费用明细南通妇幼保健院生殖医学中心创建于2000年，是苏中、苏北地区率先开展了人工授精技术，第一、第二代试管婴儿及其衍生技术的医院，在这里做一例试管婴儿一次成功最低花费2万多元就可以。在南通妇幼保健院做试管婴儿，主要费用涉及到以下这些：
1.夫妻二人身体检查费用，共计5000元左右；
2.药物促排卵和卵泡监测费用5000-20000不等，用药量越大，用药品种越好，费用越高；
3.试管婴儿取卵手术费用3000-8000元不等，与取卵个数，用药情况有关；
4.精卵结合费用一代试管3000-5000元，二代试管手术费用多加4000元左右；
5.冷冻胚胎按个或是按年收费，目前南通妇幼保健院通常是按年收费，一年2000-3000元不等；
6.胚胎移植前的健康查看费用3000-8000元不等，若是要养囊另需5000-10000元；
7.移植冷冻胚胎的费用2000元左右一年；
8.单次冻胚移植需要解冻以及移植实验室操作及手术费用共计4000元左右，也就是说二次移植费用也是4000元左右。
做试管婴儿助孕，促排费用占比是比较大的，目前南通妇幼保健院促排费用平均在5000-12000元不等，这与患者促排期间用药情况是有很大关系的，用进口药比国产药更贵一些，用药量多的费用也会更贵一些。以下是患者分享的南通妇幼保健院试管婴儿花费情况，可供大家参考：
我朋友做的一代一次性成功费用算比较少的，共两万五左右，我在这边做的二代，移植两次才成功花了4万左右，加个路费这些准备五万差不多。
网友小猴宝宝
4月中旬开始检查不孕原因，找到原因后，5月开始试管前体检，等染色体报告为20个工作日，所以，等拿到所有报告是6月初了，体检男女双方总共话费4000元不到。6月中旬建档完毕.6月22号开始进入周期打针，降调和促排卵总共打了22针，手臂和屁股，毛算花费5千左，7月12号取卵，取卵当天花费10000左右，17号移植，因为冻了5管胚胎，所以移植当天加药费，手术费，冷冻费，各种话费10000左右。总共现在4万不到。
网友命中注定
我在南京总共到移植结束的费用花了37000多，因为我光促排打大果抽血b超都花了13000多，取卵是6186，胚胎移植费用是2200，冷冻我不知道，因为取了九个只配了两个胚胎移植，之前在合肥花了十几万移植了两次都没有成功，这一次来南京重新取卵只获得两枚胚胎移植，如果这次不成，也没钱再继续了，真的不知道什么时候是个头。
网友likiwms
同城试管婴儿医院费用导航截止目前，江苏省准入开展试管婴儿的医院有33家，其中三代试管婴儿医院7家，为帮助更多人选择合适的医院，了解相应生殖中心的试管婴儿费用、成功率、流程等信息，特整理2022年江苏试管婴儿医院大全（顺序先后按照准入时间排序）以供参考。
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